Аминокислоты, пептиды и белки - Дэвени Т., Гергей Я. 1976
Анализ концевых групп и ступенчатая деградация белков и пептидов
Определение N-концевых групп 2,4-динитрофторбензольным методом
Приготовление ε-ДНФ-лизина
a-NH2-гpyппy блокируют ионами Сu2+ и ε-NН2-группу динитрофенилируют в слабощелочной среде. После удаления ионой Сu2+ выделяют ε-N-ДНФ-производное [14].
МЕТОДИКА
0,5 г лизина растворяют в 10 мл дистиллированной воды, раствор доводят до кипения и добавляют к нему небольшими порциями СuСO3. Избыток СuСO3 удаляют фильтрованием, а к раствору добавляют 1,5 г NaHCO3 и 1,5 г ДНФБ, растворенного в 20 мл этанола. Смесь встряхивают при комнатной температуре 2 ч и фильтруют. Осадок промывают дистиллированной водой, этанолом и наконец эфиром, а затем суспендируют в 5 мл дистиллированной воды, подкисляют несколькими каплями 1 н. НСl и сосуд с прозрачным раствором помещают в измельченный лед. Через охлажденный раствор пропускают сероводород для удаления ионов Сu2+. Осадок CuS удаляют фильтрованием после адсорбции его активированным углем. Прозрачный фильтрат высушивают в вакууме и ДНФ-производное перекристаллизовывают из 6 н. НСl.
ПРИМЕЧАНИЯ
δ-N-ДHФ-производное орнитина можно получить аналогичным образом. a-N-ДНФ-Гис очень быстро образуется при добавлении небольшого количества ДНФБ, а динитрофенилирование ацетильного производного дает N-ДНФ-Гис.