Аминокислоты, пептиды и белки - Дэвени Т., Гергей Я. 1976

Анализ белков с помощью низковольтного электрофореза
Низковольтный электрофорез на бумаге
Некоторые источники ошибок при проведении низковольтного электрофореза на бумаге

1. Плохое разделение, несмотря на длительный электрофорез. Причину этого явления прежде всего следует искать в недостатках буферного раствора; может быть, слишком высока его концентрация.

2. Границы отдельных фракций выявляются недостаточно четко. Причиной этого может быть низкая ионная сила буферного раствора при достаточно высоком напряжении (см. стр. 50) или тепловая денатурация некоторых белков в результате локального выделения тепла при высоком напряжении.

3. Некоторые белковые фракции остаются в месте нанесения образца. Причиной этого может быть повреждение бумаги пипеткой в месте нанесения или необратимое связывание части глобулинов с бумагой. Последнее возможно в том случае, если сыворотку наносят на сухую или недостаточно влажную полоску бумаги.

4. Фракции продолжают диффундировать после выключения тока. Чтобы избежать этого, следует сразу же после выключения тока извлекать электрофореграммы из электрофоретической камеры.

5. Повторное разделение одного и того же материала дает разные результаты. Причина плохой воспроизводимости может заключаться в изменении условий опыта. Чтобы сделать условия опыта стандартными: а) необходимо помнить, что фильтровальная бумага должна быть одного и того же типа; б) необходимо стандартизовать факторы, влияющие на электрофорез (направление потоков буферного раствора, температурам т. п.) (см. стр. 52); в) краситель должен быть одним и тем же; г) не следует менять способа количественной оценки электрофореграмм. При использовании метода элюирования мы советуем окрашивать белки кислым фуксином. Несвязавшаяся с белком часть этого красителя легко удаляется из бумаги, а связавшийся краситель затем легко элюируется. С другой стороны, при фотоэлектрометрии электрофореграмм очень удобно применять окрашивание амидовым черным 10В, так как он прочнее других красителей связывается с белками и примерно в 10 раз сильнее поглощает свет. Несмотря на то что при отмывании электрофореграмм амидовый черный невозможно полностью удалить из бумаги, фотоэлектрические измерения после окрашивания этим красителем достаточно точны.