Аминокислоты, пептиды и белки - Дэвени Т., Гергей Я. 1976

Методы иммунохимического анализа
Анализ белков с помощью реакции преципитации
Реакция кольцепреципитации (реакция преципитации на границе слоев, содержащих антиген и антитела

Принцип метода. Если наслоить раствор антигена на специфическую антисыворотку, то на границе раздела двух слоев происходит реакция преципитации.

Область применения. Определение титра антител в иммунных сыворотках.

ПРИНАДЛЕЖНОСТИ ДЛЯ ПОСТАНОВКИ РЕАКЦИИ

1. Стеклянные (преципитационные) пробирки длиной 35 мм и диаметром 2,5 мм.

2. Капиллярные (пастеровские) пипетки.

МЕТОДИКА

1. Приготовление серийных разведений антигена (см. стр. 121).

2. Постановка реакции. На дно преципитационных пробирок капиллярной пипеткой вносят по 0,04 мл исследуемой иммунной сыворотки. Затем, держа пробирки наклонно, в каждой из них капиллярной пипеткой наслаивают на сыворотку примерно 0,04 мл антигена из серии соответствующих разведений.

3. Инкубация и учет результатов реакции. Пробирки оставляют в холодильнике и на следующий день учитывают результаты реакции.

ПРИМЕЧАНИЯ

1. При положительной реакции на границе раздела между слоями антигена и иммунной сыворотки появляется беловатое опалесцирующее кольцо, видимое невооруженным глазом. В случае интенсивной реакции преципитации это кольцо появляется уже через несколько минут, и фрагменты преципитата могут осесть на дно пробирки.

2. Кольцо преципитата занимает в пробирке строго горизонтальное положение, не изменяя его даже, если пробирку осторожно наклонить. По этому признаку преципитат можно отличить от неспецифического осадка, положение которого при наклоне пробирки будет изменяться.

3. Кратность разведений антигена определяется той точностью, с которой должен быть определен титр антител; можно приготовить десяти-, пяти-, трех- и двукратные разведения антигена.

4. При учете результатов реакции удобно просматривать пробирки на темном фоне, так как в этом случае кольца преципитата лучше видны.

5. Как и в других методах титрования преципитинов, титром реакции, кольцепреципитации считается то наибольшее разведение антигена, при котором еще образуется кольцо преципитата.

6. Основное преимущество этого метода титрования антител заключается в том, что для реакции требуется небольшое количество реагентов. Диффузия растворов антигена и антител происходит довольно медленно, поэтому в реакции кольцепреципитации в меньшей степени, чем в других реакциях, выражен растворяющий эффект избытка антигена.

7. К недостаткам реакции кольцепреципитации следует отнести меньшую воспроизводимость по сравнению с вышеописанными методами, а также то, что с ее помощью нельзя определить количественного соотношения антигена и антител.