Аминокислоты, пептиды и белки - Дэвени Т., Гергей Я. 1976

Ионообменная хроматография в фиксированном слое ионообменника
Применение пластинок “Фиксион 50x8”

При использовании пластинок “Фиксион 50 х 8” надо иметь в виду следующее:

А. В проводимых исследованиях, например при разделении аминокислот, необходимо обеспечить условия (буферный раствор, молярность, pH, температура), близкие к тем, которые применяются при хроматографии на колонке, так как функциональным компонентом, слоя является тот же материал, который используется для колоночной хроматографии, т. е. сильный катионообменник.

Б. При хроматографии, высушивании, нанесении пробы, проявлении, оценке разделения, документации и т. д. можно применять ранее разработанные хорошо известные способы тонкослойной хроматографии. Например, для разделения основных аминокислот в аминокислотном анализаторе применяют буфер, имеющий концентрацию Na⁺ 0,35 М и pH 5,23; этот же буфер пригоден для разделения основных аминокислот на пластинке “Фиксион 50 х 8”. При этом, кроме основных, хорошо разделяются и идентифицируются ароматические аминокислоты Тир и Фен.

При разделении основных и ароматических аминокислот операции проводят в следующей последовательности:

1. На пластинке мягким карандашом отмечают линию старта (примерно на расстоянии 1,5 см от нижнего края).

2. Исследуемый образец наносят капилляром. Если необходимо нанести довольно большой объем разбавленного раствора, применяют подсушивание феном.

3. Пластинку помещают в герметичную хроматографическую камеру, на дне которой находится слой буферного раствора высотой 1 см.

4. Хроматографию проводят при комнатной температуре до тех пор, пока фронт буферного раствора не поднимется на высоту 15 см.

5. Пластинку извлекают из камеры и высушивают феном.

6. Пластинку опрыскивают раствором нингидрина в ацетоне и высушивают феном. Нагревание пластинки в течение нескольких минут способствует появлению пятен.

В некоторых случаях (например, при разделении смеси 16 аминокислот) пластинку “Фиксион” перед использованием необходимо уравновесить буферным раствором. При уравновешивании, как и при колоночной хроматографии, создается соответствующая ионная среда и удаляются возможные примеси, находящиеся в слое. Буферные растворы следует готовить на деионизованной воде.

В хроматографическую камеру стандартных размеров заливают 100 мл буферного раствора; при этом слой жидкости на дне должен иметь высоту 1—1,5 см. Такого количества буферного раствора достаточно для проведения хроматографии на 3 пластинках. В одну камеру одновременно можно поставить 2—3 пластинки.