Химия белка. Структура, свойства, методы исследования - Шендрик А.Н. 2022

Методы экспериментального исследования структуры белков
Хроматография

Метод хроматографии впервые был предложен в 19 веке для изучения растительных пигментов (хрома). Отсюда и его название. В настоящее время этот метод реализован в нескольких вариантах (газовая, газо-жидкостная, жидкостная и т.д. хроматография).

В основе всех методов хроматографии лежит один принцип: непрерывный поток подвижной фазы с растворенным в ней анализируемым образцом проходит через стационарную (неподвижную) фазу. Последняя, в зависимости от своей природы, по разному взаимодействует с отдельными компонентами смеси образца. В результате, компоненты вымываются и движутся относительно неподвижной фазы с различными скоростями.

Таким образом, хроматография - это процесс разделения смесей компонентов, к основе которого лежат различия в величинах констант распределения компонентов между подвижной и неподвижной фазами. Универсальность метода хроматографии, независимо от типа, связана со следующими основными факторами:

1. наличием двух фаз (подвижной и неподвижной);

2. течение подвижной фазы относительно неподвижной обеспечивает очень эффективный массообмен между ними и быстрое установление локальных равновесий;

3. компоненты анализируемой смеси всегда должны быть растворимы в подвижной фазе и иметь некоторое сродство к неподвижной фазе, что обеспечивает специфичное распределение компонентов как между фазами, так и относительно неподвижной фазы;

4. условием успешного разделения смеси на отдельные компоненты есть различие в их константах равновесия распределения.

Отдельные хроматографические методы различаются типом взаимодействий между компонентами образца и неподвижной фазы. Это: ионный обмен, растворимость, адсорбция или фильтрация, а иногда и их комбинация.