Химия белка. Структура, свойства, методы исследования - Шендрик А.Н. 2022

Методы экспериментального исследования структуры белков
Методы определения молекулярной массы белков
Определение молекулярной массы методом седиментации - Метод седиментационного равновесия

В методе седиментиационного равновесия подбирается такая скорость вращения ротора центрифуги, при которой противодействующие друг другу силы седиметации и диффузии уравновешены. В состоянии устоявшегося равновесия в зоне мениска отсутствует зона чистого растворителя. Вдоль центрифужной пробирки устанавливается градиент концентрации белка. В нижнем слое концентрация белка может быть примерно в 2 раза больше, чем в верхнем. Измеряя концентрацию белка на различных расстояниях от оси вращения можно рассчитать его ММ по уравнению:

М = 2RTln(c₂/c₁)/ω²(1 - vp)(r₂² - r₁²)

где с₂ и с₁ - концентрации белка в пробирке на расстояниях r₂и r₁ соответственно от оси вращения.

В данном случае расчет ММ не требует знания величины коэффициента диффузии. Кроме того, в методе седиментационного равновесия не вводятся никакие поправки на форму частиц. Все это обеспечивает рассмотренному методу наиболее высокую точность среди седиментационных. Основной недостаток - это очень большие затраты времени. Иногда для установления равновесия раствор приходится непрерывно центрифугировать на протяжении нескольких суток. Этот процесс можно ускорить, используя кюветы с очень небольшой высотой столба жидкости. Кроме того, метод седиментационного равновесия очень критичен к чистоте белка и его гомогенности.