ОБЩАЯ И ПИЩЕВАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ ЧАСТЬ II - Л. В. Красникова - 2016

ПРИЛОЖЕНИЕ

1. Питательные среды, используемые для микробиологического анализа пищевых продуктов

1.1. Среда Китта-Тароцци для выделения и культивирования анаэробных микроорганизмов

Проваренные кусочки печени опускают в пробирку, чтобы они закрывали дно. В пробирки на 1/2 объема наливают мясопептонный бульон с 1 % глюкозы (рН среды 7,2-7,4) и опускают поплавок. Сверху наслаивают 0,5 — 1,0 см вазелинового масла. Пробирки стерилизуют при температуре 121±1 °С в течение 20 мин.

1.2. Среда с лизином для определения диких дрожжей родов Candida, Torulopsis, Brettanomyces и др.

К 1 дм³ водопроводной воды прибавляют 50 г глюкозы, 3 г лизина, 1 г KH₂PO₄, 1 г MgSO₄ и 15 — 20 г агара. После расплавления агара на водяной бане среду разливают по пробиркам или колбам и стерилизуют при температуре 116±1°С в течение 20 мин.

1.3. Среда MRS для учета молочнокислых бактерий

В мерную колбу вместимостью 1 дм³ вливают 200 см³ воды и вносят: 20 г глюкозы; 2 г калия фосфата двузамещенного; 2 г натрия ацетата; 0,05 г MnSO₄ • 4H₂O; 0,02 г MgSO₄ •7H₂O; 50 см³ дрожжевого автолизата, 200 мг цистеина.

К подготовленному раствору прибавляют отдельно растворенные в небольшом количестве горячей дистиллированной воды 10 г пептона и 1 мл препарата Твин-80 и 500 мл гидролизованного молока. Доводят объем жидкости дистиллированной водой до 1 дм³. Устанавливают pH=6,2-6,6 (питьевой содой или лимонной кислотой).

Для получения плотной среды к 1 дм³ приготовленного раствора добавляют 15 — 18 г агара. После растворения компонентов среду разливают в колбы или пробирки и стерилизуют в автоклаве при температуре 121±1 °С в течение 15 мин.

1.4. Сусловый агар с кристаллическим фиолетовым для выявления диких дрожжей рода Saccharomyces

К 1 дм³ охмеленного сусла (массовая доля сухих веществ 7 %) прибавляют 20 г агара и 2 г кристаллического фиолетового. Агар расплавляют на водяной бане. Среду фильтруют через ватный фильтр, разливают в колбы и стерилизуют при температуре 116±1 °С в течение 20 мин.

1.5. Среда Эндо

Среда Эндо выпускается микробиологической промышленностью в виде сухого порошка. В лаборатории ее готовят согласно прописи, указанной на этикетке. Среду готовят в день ее использования.

1.6. Среда Левина (лактозоэозинметиленовый агар)

Среда Левина предназначена для выделения и дифференциации энтеробактерий и коагулазоположительных стафилококков. Сначала готовят основную среду следующего состава: 10 г пептона; 15 г агара; 2 г К₂НРO₄; дистиллированная вода - до 1 дм³.

Среду разливают в колбы объемом 100 см и стерилизуют при температуре 121±1 °С в течение 15-30 мин.

Для приготовления дифференциальной среды к 100 см³ расплавленной основной среды добавляют следующие растворы, простерилизованные дробно текучим паром в течение трех суток: 5 см³ 20 %-го раствора лактозы, 2 см³ раствора эозина щелочного; 1,5 см³ 0,5 %-го раствора метиленового синего.

Готовую среду разливают в чашки Петри и подсушивают. Она имеет сине-фиолетовый цвет.

Микроорганизмы, ферментирующие лактозу (в частности, БГКП), образуют на этой среде колонии даметром 1,5-2,0 мм фиолетового цвета с металлическим блеском. Лактозонегативные энтеробактерии (сальмонеллы, дизентерийные палочки) образуют прозрачные бесцветные колонии диаметром 1,0-1,5 мм. Коагулазоположительные стафилококки образуют на среде Левина мелкие колонии с темным центром. Широкое применение нашла готовая сухая среда Левина, выпускаемая промышленностью.

1.7. Среда Плоскирева

Среда Плоскирева выпускается промышленностью в сухом виде. Среду готовят согласно указаниям на этикетке.

Готовая среда прозрачная и имеет розовато-желтый цвет. Энтеробактерии, ферментирующие лактозу, образуют на этой среде колонии брусничного цвета. Лактозоотрицательные бактерии вырастают в виде бесцветных или слабоокрашенных колоний.

1.8. Среда Вильсона-Блера

Железно-сульфитная среда Вильсона-Блера предназначена для выделения сульфитредуцирующих анаэробов. Для приготовления этой среды к 100 см³ стерильного расплавленного и охлажденного до 80 °С мясопептонного агара с 1 % глюкозы добавляют 10 см 20 %-го свежеприготовленного стерильного (выдержанного в течение 1 ч в текучем паре) раствора натрия сульфита и 1 см 8 %-го раствора железа хлорида, приготовленного на стерильной воде. Среду разливают в пробирки высоким столбиком и без стерилизации ставят в термостат с температурой 37±1 °С для поверки стерильности. Материал засевают уколом в столбик или в расплавленную и охлажденную среду. Сульфитредуцирующие анаэробы образуют в среде колонии черного цвета или дают сплошное почернение среды.

1.9. Желточно-солевой агар (ЖСА) (элективная среда для определения стафилококков)

Сначала готовят желточный раствор. Для этого к 200 см³ стерильного физиологического раствора асептически добавляют один яичный желток и взбалтывают. Желточный раствор хранят в холодильнике не более 4 сут.

Для приготовления среды к 150 см³ расплавленного и охлажденного до 45 °С мясопептонного агара (рН 7,2-7,4), содержащего 7,5-10 % хлорида натрия, стерильно добавляют 50 см³желточного раствора, взбалтывают и разливают по чашкам Петри. Хранят в холодильнике в течение 7 сут. со дня приготовления.