РОСТ И КУЛЬТИВИРОВАНИЕ БИООБЪЕКТОВ - В. М. Самыгин - 2016

ГЛАВА 1. ОРГАНИЗАЦИЯ РАБОТ ПО КУЛЬТИВИРОВАНИЮ БИООБЪЕКТОВ

1.1. Общие требования к организации работ в микробиологических лабораториях

В целях регламентации работ с биологическими объектами микроорганизмы по степени биологической опасности (патогенности) подразделяются на четыре группы:

1 группа - возбудители особо опасных инфекций;

2 группа - возбудители высоко контагиозных заболеваний;

3 группа - возбудители инфекционных болезней, выделяемые в самостоятельные нозологические группы;

4 группа - условно-патогенные микроорганизмы.

В число патогенных биологических агентов (ПБА) входят бактерии, вирусы, хламидии, риккетсии, простейшие, грибы, микоплазмы, в том числе генно-модифицированные, яды биологического происхождения (токсины), гельминты, а также любые объекты и материалы биотической и абиотической природы, подозрительные на их содержание.

Эта принятая в РФ классификация разработана в соответствии с рекомендациями ВОЗ, но дополнительно включает яды биологического происхождения, а нумерация групп патогенности отличается от классификации ВОЗ обратным порядком. Согласно этой классификации, определяется структура, оснащение и организация работ в лаборатории.

1.2. Регламентация работ с патогенными микроорганизмами

Степень опасности определяется как свойствами самого биологического объекта, так и факторами, ее повышающими. Такими факторами являются особенности выполняемых работ (диагностические, экспериментальные, производственные), их организация, состояние защитных инженерных систем, знание и соблюдение персоналом правил биологической безопасности, профессиональная подготовленность специалистов. Поэтому, помимо санитарно-гигиенических правил, необходимо обеспечить биологическую и экологическую безопасность персонала, населения и окружающей среды, то есть защиту от возможного попадания микроорганизмов в окружающую среду.

В целях создания и совершенствования системы обеспечения биологической безопасности в РФ создана нормативно-правовая основа в виде блока санитарно-эпидемиологических правил (СП), введенных в действие постановлением Главного государственного санитарного врача РФ: СП «Порядок выдачи санитарно-эпидемиологического заключения о возможности проведения работ с возбудителями инфекционных заболеваний человека I- IV групп патогенности (опасности), генно-инженерно-модифицированными микроорганизмами, ядами биологического происхождения и гельминтами» и другими документами.

В связи с внедрением в практику методов генной инженерии в дополнение введены МУ «Организация работы при исследовании методом ПЦР материала, инфицированного патогенными биологическим агентами III- IV групп патогенности».

Соблюдение СП является обязательным для юридических лиц (учреждений, организаций), независимо от их ведомственной принадлежности, индивидуальных предпринимателей на территории всей страны. Требования к помещениям, оборудованию, порядку использования индивидуальных средств защиты, обеззараживанию материала и уборке помещений определены санитарными правилами дифференцированно. Иначе говоря, деятельность предприятий (учреждений, организаций) в обязательном порядке лицензируется.

1.3. Лицензирование деятельности, связанной с использованием возбудителей инфекционных заболеваний

Лицензия - разрешение на ведение какой-либо деятельности. Лицензия составляется на юридическое лицо (учреждение, организацию) или индивидуального предпринимателя. Обязательными условиями к соискателю лицензии являются:

- наличие соответствующих государственным санитарно-эпидемиологическим нормам и правилам производственных помещений, оборудования и приборов, необходимых для осуществления лицензируемой деятельности;

- соблюдение государственных санитарно -эпидемиологических норм и правил проведения работ с возбудителями инфекционных заболеваний;

- наличие у работников юридического лица или у индивидуального предпринимателя профессионального образования или специальной подготовки, соответствующих требованию и характеру выполняемой работы.

Для получения лицензии в лицензирующий орган, наряду с заявлением о предоставлении лицензии, копиями учредительных документов и свидетельства о государственной регистрации, копией свидетельства постановки на учет в налоговом органе, предоставляются копии документов, подтверждающих квалификацию работников и обязательно копия санитарно-эпидемиологического заключения о возможности проведения работ с возбудителями инфекционных заболеваний человека соответствующей группы патогенности, выданного в установленном порядке.

Лицензирующий орган ведет реестр лицензий, осуществляет в пределах своей компетенции контроль над соблюдением лицензиатом лицензионных требований и условий в форме плановых и внеплановых проверок.

1.4. Планировка и оснащение лаборатории

1.4.1. Требования к помещениям и оборудованию лабораторий

Планировка и оснащение лабораторий осуществляется согласно «Санитарно-эпидемиологическим требованиям к лабораториям» (Санитарные правила), которые предусматривают:

- выбор земельного участка под строительство (реконструкцию) зданий;

- наличие водопровода, канализации, электричества, отопления, вентиляции;

- обеспечение химической, микробиологической, токсикологической безопасности;

- обеспечение условий по хранению и транспортировке материалов (микроорганизмов).

Производственные лаборатории должны располагаться в отдельно стоящих зданиях, не связанных с производственными помещениями или изолированном блоке здания, имеющем отдельный вход, а производственные лаборатории могут располагаться в изолированном блоке производственного корпуса. Диагностические лаборатории должны иметь два входа: один - для сотрудников, другой - для доставки материала на исследование. (Допускается получение материала через передаточное окно). В лабораториях научно-исследовательских учреждений, а также в производственных лабораториях допускается наличие одного входа.

Все помещения лаборатории должны иметь естественное и искусственное освещение в зависимости от вида работ в соответствии с требованиями действующих нормативных документов. Помещения лаборатории должны быть разделены на «грязную» («заразную») и «чистую» зоны. Планировочные решения и размещение оборудования должны обеспечивать поточность продвижения ПБА и выполнение требований Санитарных правил.

Лаборатории должны иметь набор рабочих комнат и других помещений, в соответствии с производственной мощностью и номенклатурой выполняемых работ. В соответствии с этим схема микробиологической лаборатории выглядит следующим образом (рис. 1).

Рис. 1. Примерная схема микробиологической лаборатории: X - окно для передачи материала

В «чистой» зоне располагаются:

- комната (гардероб) для верхней одежды;

- помещения для проведения подготовительных работ (препараторская, моечная, приготовление и розлив питательных сред и др.);

- стерилизационная;

- помещение с холодильной камерой или холодильниками для хранения питательных сред и диагностических препаратов;

- комната отдыха и приема пищи;

- комната для работы с документацией и литературой;

- кабинет заведующего;

- комната для надевания рабочей одежды;

- подсобные помещения;

- туалет.

В «грязной» зоне находятся:

- помещение для приема и регистрации материала;

- боксированные помещения или помещения, оснащенные боксами биологической безопасности;

- комнаты для проведения бактериологических исследований (в том числе помещения для культивирования биообъектов);

- комнаты для проведения серологических исследований;

- комната для люминесцентной микроскопии;

- термостатная комната;

- автоклавная для обеззараживания.

- устройство автономной приточно-вытяжной вентиляции с установкой фильтров тонкой очистки воздуха, выбрасываемого из «заразной» зоны (или оборудование этих помещений боксами биологической безопасности).

Внутренняя отделка помещений должна быть выполнена в соответствии с их функциональным назначением. Поверхность пола, стен, потолка в лабораторных помещениях «заразной» зоны должна быть гладкой, без щелей, легко обрабатываемой, устойчивой к действию моющих и дезинфицирующих средств, полы не должны быть скользкими. Имеющаяся вытяжная вентиляция из «заразной» зоны лаборатории должна быть изолирована от других вентиляционных систем и оборудована фильтрами тонкой очистки воздуха. При использовании боксов биологической безопасности II класса, система вытяжной вентиляции может быть использована без установки фильтров. Эксплуатация вентиляционных устройств проводится в соответствии с Инструкцией по эксплуатации и контролю эффективности вентиляционных устройств.

В условиях жаркого климата разрешается установка кондиционеров в рабочих комнатах и боксах. Во время работы с ПБА кондиционеры должны быть отключены (или работать по принципу рециркуляции).

Лабораторная мебель в «заразной» зоне должна иметь покрытие, устойчивое к действию моющих и дезинфицирующих средств. Поверхность столов не должна иметь швов и трещин.

Помещения, где проводится работа с биологическим объектами, должны быть оборудованы бактерицидными лампами в соответствии с «Методическими указаниями по применению бактерицидных ламп для обеззараживания воздуха и поверхностей в помещениях».

Лампы включают после проведения влажной уборки. Вход в помещение разрешается только после проветривания не менее 30 минут. При применении безозоновых бактерицидных ламп проветривания не требуется.

При ориентации окон на юг необходимо предусмотреть защиту рабочих столов от попадания прямого солнечного света путем использования светозащитных пленок, жалюзи из материала, устойчивого к дезинфектантам.

На окна цокольного и первого этажей следует устанавливать металлические решетки, не нарушающие правил пожарной безопасности. Наличие охранной сигнализации не исключает необходимости их установки. Помещения лабораторий должны быть непроницаемы для грызунов и насекомых. Лаборатория должна быть обеспечена средствами пожаротушения.

1.4.2. Требования к проведению работ в лаборатории

Приборы, оборудование и средства измерений, используемые в работе лаборатории, должны быть аттестованы, технически исправны, подвергаться метрологическому контролю в установленные сроки, иметь технический паспорт. На каждый прибор (установку) должны быть разработаны правила (инструкция) по их эксплуатации с учетом требований биологической безопасности. В лаборатории должны использоваться дезинфицирующие средства, допущенные к применению в установленном порядке.

В боксированных помещениях «заразной» зоны лаборатории (или в боксах биологической безопасности) проводятся:

- работа по культивированию микроорганизмов;

- приготовление суспензий;

- заражение культуры клеток и куриных эмбрионов;

- работа с лиофилизированными ПБА;

- работа по ведению коллекционных штаммов.

При пипетировании необходимо пользоваться только резиновыми грушами или автоматическими устройствами. Бактериологическая петля должна быть замкнута в непрерывное кольцо. Допускается использование одноразовых, промышленно изготовленных петель. Перед использованием посуда, пипетки, оборудование, шприцы и так далее должны быть проверены на целостность и исправность. Остатки микробных суспензий, использованная посуда, твердые отходы из «заразной» зоны лаборатории должны собираться в закрывающиеся емкости и передаваться в автоклавную или дезинфицироваться на месте.

Работа в помещениях должна строиться в соответствии с Правилами внутреннего распорядка, которые составляются на основании Санитарных правил и утверждаются руководителем лаборатории.

В «заразной» зоне лаборатории запрещается:

- пипетировать ртом, переливать жидкий инфекционный материал через край сосуда (пробирки, колбы, флакона и др.);

- хранить верхнюю одежду, головные уборы, обувь, зонты, хозяйственные сумки, косметику и тому подобное, а также продукты питания;

- сливать жидкие отходы (инфицированные жидкости, исследуемый материал и т. д.) в канализацию без предварительного обеззараживания.

Все сотрудники, работающие с ПБА III-IV групп патогенности, должны находиться на диспансерном наблюдении. Периодические медицинские осмотры проводятся в соответствии с действующими приказами.

1.4.3. Инженерное оснащение лабораторий

Лаборатория должна быть обеспечена водопроводом, канализацией, электричеством, отоплением, вентиляцией и теплоснабжением для воздухонагревателей приточных установок. Вытяжные установки, обслуживающие заразные зоны, вытяжные и ламинарные шкафы оборудуются ультрафиолетовыми стерилизаторами воздуха. Вентиляционные сети выполняются из воздуховодов 2 класса герметичности, типа спирально - навитых с ниппельными соединениями на манжетных уплотнителях или силиконовом герметике. Не допускается применение фланцевых или реечных соединений воздуховодов.

В условиях жаркого климата разрешается установка приточных установок с охлаждением воздуха или кондиционеров в рабочих комнатах и боксах. В конструкции кондиционеров должна быть система стерилизации рециркуляционного воздуха. Использование сплитсистем настенного, потолочного или кассетного типа не допускается.

К общелабораторному оборудованию микробиологических лабораторий относится:

- оборудование для взвешивания по ГОСТу 24104 (например, весы (электронные) для взвешивания компонентов питательных сред и реактивов);

- оборудование для подготовки лабораторной воды (дистилляторы, бидистилляторы, деионизаторы);

- оборудование и принадлежности для определения рН (рН-метры- ионометры);

- лабораторная посуда;

- общелабораторные принадлежности (перчатки, фильтровальная бумага, ножницы, пинцеты, скальпель и др.);

- оборудование для инкубации и термостатирования (термостаты, холодильники и морозильные камеры и др.);

- увеличительное оборудование для микроскопии (лупа, микроскопы световые и др.);

- оборудование для сушки, стерилизации и дезинфекции (сухожаровые шкафы, автоклавы);

- оборудование для мойки и дезинфекции (посудомоечная машина, ультразвуковые мойки, стиральная машина);

- оборудование для утилизации лабораторных отходов (специальные установки для утилизации инфицированных отходов (парогенераторы), например, одноразового применения из пластмассы, латекса, резины бумаги и картона, металлов и др.).

Специальное оборудование для микробиологических лабораторий включает:

- автоматические установки для приготовления питательных сред (средоварки);

- устройства для отбора проб воздуха (в чашки Петри, аспираторы);

- для учета микробного роста (счетчики колоний);

- оборудование для компьютеризации и автоматизации бактериологических исследований (для идентификации, определения чувствительности к антибиотикам, определения обсемененности продуктов питания и объектов внешней среды (на основе принципа фотометрии или флюоресценции));

- оборудование для культивирования микроорганизмов.