Аминокислоты, пептиды и белки - Дэвени Т., Гергей Я. 1976

Методы средне- и высоковольтного электрофореза
Метод диагонального электрофореза
Выделение С-концевого пептида из триптического гидролизата белков

Благодаря специфичности триптического гидролиза возникающие в ходе его пептиды имеют на С-конце лизин или аргинин, за исключением С-концевого пептида самого белка (если, конечно, на его С-конце не находится ни лизин ни аргинин). Карбоксипептидаза В специфически отщепляет С-концевые основные аминокислоты, что приводит к потере зарядов в концевых пептидах. Если пептид не имеет на С-конце ни лизина, ни аргинина, т. е. действительно является С-концевым пептидом белка, то после обработки карбоксипептидазой он не потеряет своего заряда.

Исследуемый белок гидролизуют трипсином и гидролизат подвергают электрофорезу на бумаге. Ориентируясь по контрольной полоске, вырезают полоску для аналитического диагонального электрофореза и осторожно опрыскивают ее карбоксипептидазой В, растворенной в 0,1%-ном бикарбонате аммония. Опрысканную полоску на 1 ч помещают в эксикатор, содержащий воду, при 37°С. После инкубации полоску высушивают и подвергают вновь электрофорезу под прямым углом к первоначальному направлению.

Все пептиды, у которых на С-конце находится лизин или аргинин, смещаются от диагонального положения, в котором остается только С-концевой пептид исследуемого белка.