Аминокислоты, пептиды и белки - Дэвени Т., Гергей Я. 1976
Методы иммунохимического анализа
Получение иммунной сыворотки
Схемы иммунизации без адъюванта
А. Ежедневно в течение первых пяти дней в ушную вену кролику вводят возрастающие количества раствора белкового антигена в дозах 1, 2, 4, 8 и 16 мг (концентрация белка в сыворотке крови обычно около 7%). Затем делают недельный перерыв, после которого серию инъекций повторяют. На четвертой неделе иммунизации под кожу животному вводят раствор антигена, содержащий 25 мг белка; в последующие 3 дня вводят еще по 20 мг белка в ушную вену. На 7—9-й день после последней инъекции у животного берут кровь, получают сыворотку и определяют титр антител [11].
Б. Курс иммунизации длится 4 нед. Однократная доза составляет 1—2 мл 1%-ного раствора белкового антигена. На первой неделе в первые три дня делают по одной инъекции в ушную вену. В каждую из последующих трех недель в первый день иммунизируют внутрибрюшинно, а на второй и третий — внутривенно. Через неделю после иммунизации берут кровь, получают сыворотку и определяют титр антител.
В. Для получения кроличьей антисыворотки к белкам сыворотки человека рекомендуется описанный ниже метод иммунизации, позволяющий приготовить, по-видимому, наилучшую иммунную сыворотку для выявления многих белковых компонентов, в том числе иммуноглобулинов. В этом методе совмещены две схемы иммунизации: по Мильгрому и по Проому.
Сначала кроликов иммунизируют по Мильгрому. Для этого из ушной вены животного берут 2 мл крови, смешивают с 0,5 мл 3,8%-ного раствора лимоннокислого натрия, осаждают эритроциты и трижды отмывают их пятью объемами физиологического раствора хлористого натрия. К осадку отмытых эритроцитов прибавляют два объема инактивированной сыворотки человека группы AB и, периодически помешивая, инкубируют смесь в течение 1 ч при комнатной температуре. Затем эритроциты вновь трижды отмывают, доводят объем суспензии физиологическим раствором до 2 мл и вводят в вену тому же самому кролику. Эти инъекции повторяют каждые 3 дня, пока титр антиглобулиновых антител не достигнет 1: 1000—2000 в реакции пассивной гемагглютинации с эритроцитами Rh (D)+, сенсибилизированными неполными анти-D-антителами с титром 1:32.
Как только титр антиглобулиновых антител достигает указанной величины, иммунизацию продолжают по схеме Проома. Для этого белки человеческой сыворотки адсорбируют на алюминиевокалиевых квасцах; 25 мл стерильной сыворотки разбавляют 80 мл дистиллированной воды и к полученному раствору прибавляют 90 мл 10%-ного раствора алюминиево-калиевых квасцов. С помощью 5 н. NaOH подводят pH раствора до 6,5. Образовавшийся осадок собирают центрифугированием и, отбросив надосадочную жидкость, дважды промывают его 200 мл физиологического раствора, содержащего мертиолат (1:10 000). Конечный объем суспензии доводят до 100 мл физиологическим раствором и хранят при +4°С не более 14 дней. По 5 мл этой суспензии вводят животным внутримышечно в область бедра 2—3 раза с интервалом в 14 дней. На 9— 10-й день после последней иммунизации у животных берут кровь. За процессом иммунизации можно следить иммуноэлектрофоретически, исследуя образцы, получаемые во время очередной инъекции антигена.