Аминокислоты, пептиды и белки - Дэвени Т., Гергей Я. 1976

Гидролиз белков и пептидов
Подготовка исследуемого материала для гидролиза
Восстановление и карбоксиметилирование белков и пептидов

Исследуемый материал растворяют в 6 М мочевине при pH 7,2 и добавляют меркаптоэтанол в 10-кратном молярном избытке по отношению к содержанию цистеина. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 ч, затем к ней добавляют иод- или бромацетат в 50—100-кратном молярном избытке по отношению к цистину, содержащемуся в исследуемом образце, оставляют на 2 ч при комнатной температуре и на сутки при 4°С. После этого раствор диализуют против дистиллированной воды для удаления мочевины.

ПРИМЕЧАНИЯ

1. Поскольку свободные SH-группы восстановленных белков очень реакционноспособны, для предотвращения реокисления их следует карбоксиметилировать иод- или бромацетатом.

2. Восстановленные и карбоксиметилированные белки обычно плохо растворяются в воде. Если при снижении концентрации мочевины они выпадают в осадок, то необходимость диализа отпадает. В этом случае белок, выпавший в осадок, можно непосредственно отмыть от мочевины 0,01 н. НСІ, при этом удаляется также избыток алкилирующего реагента.

3. После карбоксиметилирования и отмывания кислотой или после диализа исследуемый материал рекомендуется суспендировать в дистиллированной воде и лиофилизировать.