Аминокислоты, пептиды и белки - Дэвени Т., Гергей Я. 1976

Гидролиз белков и пептидов
Подготовка исследуемого материала для гидролиза
Гидролиз белков и пептидов в 6 н. НСl

Принцип метода. Гидролиз проводят при 105°С в 6 н. НСl в запаянной ампуле.

Область применения. Гидролнз белков и пептидов для определения их аминокислотного состава.

МЕТОДИКА

а) Очистка НСl. Концентрированную НСl многократно перегоняют в стеклянном дистилляционном аппарате (фирма Quikfift, США) над SnCl₂. В экспериментах используют фракцию с постоянной точкой кипения.

б) Гидролиз. Гидролизуемый материал растворяют или суспендируют в 100—200-кратном избытке 6 н. НСl в ампуле.

Через ампулу продувают азот или откачивают из нее воздух, а затем ее запаивают и 24—72 ч инкубируют при 105°С.

в) Удаление соляной кислоты. Гидролизат большого объема разбавляют дистиллированной водой и затем упаривают в ротационном испарителе. Сухой остаток суспендируют в небольшом количестве дистиллированной воды и упаривание повторяют. Гидролизат в небольшом объеме переносят в чашку Петри и для удаления кислоты помещают в вакуумный эксикатор над КОН или Р₂O₅.

ПРИМЕЧАНИЕ

При гидролизе происходит, разрушение некоторых аминокислот: полностью распадается триптофан, на 50—60%—карбоксиметилцистеин и на 5—10% — треонин и серин. Эти потери следует учитывать при количественном анализе, вводя соответствующие поправки. Чем быстрее производится удаление кислоты, тем меньше вероятность нежелательных побочных реакций.