Аминокислоты, пептиды и белки - Дэвени Т., Гергей Я. 1976

Гидролиз белков и пептидов
Частичный кислотный гидролиз белков и пептидов

Принцип метода. Если исследуемый белок или пептид, растворенный в концентрированной НС1, инкубировать при 37°С в течение 72—96 ч, то происходит их частичное разрушение. В полученном гидролизате среди прочих продуктов расщепления преобладают ди- и трипептиды, т.е. при гидролизе происходит расщепление относительно небольшой части пептидных связей.

Область применения. Структурный анализ больших пептидов, сравнительный анализ белков, выделение определенных пептидов (например, кислых, основных и нейтральных пептидов) из белков и полипептидов.

МЕТОДИКА

Белок или пептид гидролизуют, в 100-кратном избытке концентрированной НСl при 37°С в течение 3—4 дней в запаянных ампулах, из которых откачан воздух. После гидролиза кислоту удаляют, как описано выше.

ПРИМЕЧАНИЯ

1. Во время гидролиза происходит разрушение всех остатков триптофана.

2. Гидролизаты в среднем на 25% состоят из свободных аминокислот, а содержащиеся в них пептиды в основном представлены дипептидами.

3. Частичный гидролиз не в концентрированной, а в разбавленной кислоте может привести к артефактам, возникающим в результате реакций транспептидирования.

4. Перед частичным гидролизом рекомендуется окислить исследуемый материал надмуравьиной кислотой в силу тех же самых причин, о которых уже упоминалось в разделе, посвященном полному гидролизу.