Аминокислоты, пептиды и белки - Дэвени Т., Гергей Я. 1976

Гидролиз белков и пептидов
Гидролиз белков и пептидов химотропсином

Принцип метода. Под действием химотрипсина разрушаются пептидные связи, в образовании которых принимают участие карбоксильные группы ароматических аминокислот.

МЕТОДИКА

К 1%-ному раствору гидролизуемого субстрата (белка) прибавляют 1/30 часть (по отношению к количеству белка) кристаллического химотрипсина. Смесь помещают в автотитратор и гидролизуют в атмосфере азота при медленном перемешивании, поддерживая pH 8,0 автоматическим добавлением 0,1 н. раствора NaOH. Гидролиз продолжается до тех пор, пока не прекратится потребление раствора щелочи. Обычно для этого требуется 4—8 ч, после чего фермент инактивируют кипячением, поместив реакционную смесь на 10 мин в кипящую водяную баню. Осадок удаляют фильтрованием, а фильтрат лиофилизируют.

ПРИМЕЧАНИЯ

1. Химотрипсии гораздо менее специфичен, чем трипсин. Избирательное расщепление пептидных связей, в которых принимают участие карбоксильные группы ароматических аминокислот, происходит только при краткосрочном гидролизе. Длительный гидролиз приводит к разрушению и других пептидных связей, например образованных остатками лейцина, гистидина и глутамина.

2. Очень устойчивы к действию химотрипсина связи Тир-Про и Фен-Про, частично устойчивы связи, подобные Тир-Тир.