Химия белка - Часть 1 - Общая химия белка - Ашмарин И. П 1968

Выделение и очистка белков
Удаление небелковых веществ

В общем, эта задача проще, нежели проблема фракционирования самих белков. Освобождение от значительной части низкомолекулярных примесей может быть достигнуто многократным переосаждением выделяемого белка с последующим растворением в средах, не содержащих удаляемых соединений. Различные методы осаждения описаны ниже. При этом, однако, трудно добиться полной очистки от низкомолекулярных примесей. Кроме того, при переосаждении часто приходится вводить в препарат те или иные вещества — например, осадители. Поэтому для полного освобождения от низкомолекулярных примесей приходится пользоваться диализом (или электродиализом), а также методом молекулярной фильтрации с помощью так называемых сефадексов. Последний прием будет описан позже в связи с применением сефадексов для фракционирования белков.

Что касается диализа, то в настоящее время описано немало приемов и приспособлений, облегчающих и ускоряющих этот процесс. Большое значение имеет выбор мембран, достаточно прочных и в то же время достаточно проницаемых для низкомолекулярных соединений. Заслуживает предпочтения целлофан, хотя в ряде случаев можно использовать и мембраны из коллодия с обязательным контролем их на наличие трещин. Диализ ускоряется при периодическом или постоянном обновлении внешней жидкости, а также при перемешивании как внутренней, так и внешней жидкости. Заслуживает виймання рекомендация Гауровица о расположении мешочка с диализируемым солевым раствором белка ближе к верхней части сосуда с внешней жидкостью. При этом слои внешней жидкости у поверхности мешочка, быстро обогащающиеся солями, приобретают большую плотность и «стекают» па дно сосуда, уступая место свежим порциям внешней жидкости.

Значительные трудности возникают при необходимости удаления высокомолекулярных примесей, например, нуклеиновых кислот и полисахаридов. Вообще говоря, все описанные ниже приемы фракционирования белков используются и для отделения их от этих биополимеров. Кроме того, нуклеиновые кислоты и полисахариды могут быть разрушены с помощью соответствующих гидролитических энзимов. Липиды при выделении и очистке водорастворимых белков обычно не следуют за ними, особенно при многостадийной очистке. Однако их удаление в тех случаях, когда они образуют с белком прочный комплекс, чрезвычайно затруднительно, ибо экстрагенты липидов — органические растворители — могут денатурировать белок.