Практическая химия белка - А. Дарбре 1989
Аналитические методы
Окрашивание белков на нитроцеллюлозной бумаге
Окрашивание с помощью индийских чернил
Белки разделяются с помощью электрофореза в градиентных гелях (от 3,3 до 20%) и электрофоретически переносятся на нитроцеллюлозную бумагу (фирма Schleicher and Schuell) [373].
Нитроцеллюлозные полоски с белком промывают 4 раза по 10 мин в 250 мл 0,15 М NaCl в буфере 0,01 М Na2HPО4/NaH2PО4 (pН 7,2), содержащем 0,3% твина 20 (PSB-TW), при 37 °С в пластиковых водонепроницаемых боксах при легком перемешивании на водяной бане. После каждой промывки ополаскивают полоску деионизованной водой.
Для окрашивания используют чертежные чернила Pelikan Fount, India Ink и чернила для автоматических ручек (Pelikan AG, D-3000).
Добавляют к 200 мл исходного буфера чернила (1 мкл/мл) и погружают в раствор пластинку (180x200 мм) минимум на 2 ч, но лучше на ночь при перемешивании. Небольшое увеличение в интенсивности окрашивания достигается добавлением 10% глутарового альдегида. Обесцвечивания не требуется, пластинку ополаскивают деионизованной водой 5 мин.
Чувствительность обнаружения зависит от природы белка и варьирует от 80 нг (ß-галактозидаза) до 520 нг (овальбумин). Белки проявляются в виде светло-серых полос на желто-сером фоне. Гели можно хранить в указанном буфере в течение месяца без видимых изменений.
Индийские чернила дают лучшие результаты, чем другие красители (амидочерный, фаст-грин или кумасси) [250].