Практическая химия белка - А. Дарбре 1989

Энантиомерный анализ смеси аминокислот методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
Реагенты
Растворы для ВЭЖХ

Буфер I. К 0,2 М раствору пиридина добавляют ледяную уксусную кислоту до pH 3,4.

Буфер II. К 0,4 М раствору пиридина добавляют ледяную уксусную кислоту до pH 5,3.

Реагент ОФА. 30 г борной кислоты растворяют в 1 л воды и добавляют КОН до pH 9,5—10 и затем 2,5 г ЭДТА. Растворяют 1,0 г о-фталевого альдегида и 0,5 мл меркаптоэтанола в 10 мл метанола и медленно приливают этот раствор к первому при размешивании. Полученную смесь фильтруют через фильтр Millipore (0,22 мкм).

Хиральная мобильная фаза. 8 мМ (1,384 г) N.N-ди-н-пропил-L-аланина и 4 мМ (0,8 г) ацетата меди растворяют в 1 л воды (pH 5,3—5,5), раствор фильтруют через тот же фильтр и деаэрируют в вакууме.

Таблица 9.1. Разделение аминокислот методом ВЭЖХ. Колонка: Spherisorb LC-18, 5 мкм, 150X4,6 мм, хиральная добавка: Сu(N,N-ди-н-пропил-L-аланин)₂

^а Время удерживания определялось отдельно для каждой аминокислоты с момента выхода свободного объема колонки V₀.

^б Время выхода V₀ 5 мин, определялось по появлению сигнала растворителя на хроматограмме.

^в Время выхода V₀ 3,7 мин.

^г Аlа и Pro каждый в отдельности разделены на колонке (150X4,6 мм) LC-18 (фирмы Supeleo), для обнаружения использовалась реакция с нингидрином, а также измерение оптической плотности при 570 нм (Ala) и 440 нм (Pro). Время выхода V₀ 5 мин.