Практическая химия белка - А. Дарбре 1989

Энантиомерный анализ смеси аминокислот методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
Заключение

В любой лаборатории, имеющей хроматограф высокого разрешения с соответствующим детектором, легко наладить двустадийную хроматографическую систему для разделения аминокислот на энантиомеры. Можно использовать обычные продажные колонки без модификации. Повысить эффективность разделения можно с помощью создания градиента концентрации ацетонитрила, позволяющего анализировать одновременно нейтральные и ароматические аминокислоты, и установкой крана на выходе с колонки, отводящего большую часть элюата в коллектор и только небольшую — в детектор для определения.

В альтернативном варианте энантиомерного анализа с катионообменной смолы собирают каждую из аминокислот по отдельности в летучем буфере (0,1 М пиридин — ацетат, pH 3,1; затем 0,4 М пиридин — ацетат, pH 5,3) с последующим разделением на изомеры на обращенной фазе с хиральной добавкой (Engel, 1981, частное сообщение). В тех случаях, когда смесь содержит не все белковые аминокислоты, стадия ионообменной хроматографии может быть опущена.

Изменение конфигурации компонента хиральной добавки приводит к изменению порядка выхода с колонки D- и L-изомеров; результаты такого эксперимента могут дополнительно служить для подтверждения их соотношения. Изменение этого соотношения свидетельствует о наличии примесей в образце.