Практическая химия белка - А. Дарбре 1989

Традиционная стратегия определения структуры белков
Фракционирование растворимых пептидов
Высоковольтный электрофорез и хроматография на бумаге

Электрофорез и хроматография на бумаге удобны как быстрые методы очистки средних и коротких пептидов (разд. 10.8.2). Электрофорез обычно проводят при pH 6,5, 3,5 и 2,1. При этих pH боковые цепи остатков лизина и аргинина, как и N-концевые аминогруппы, полностью протонированы. При pH 6,5 имидазольное кольцо гистидина частично протонировано, а карбоксильные группы полностью ионизированы. При pH 3,5 гистидин полностью протонирован, а карбоксильные группы протонированы частично. При pH 2,1 карбоксильные группы протонированы полностью, исключение составляет сульфогруппа боковой цепи цистеиновой кислоты. Подвижность пептидов в электрофорезе строго зависит от их суммарного заряда и размера [46J, их локализация на бумаге определяется окрашиванием боковой полоски листа нингидрином (в случае одномерных карт) или опрыскиванием раствором флуорескамина низкой концентрации (для одномерных и двумерных карт). Процесс электрофоретического разделения на бумаге очень чувствителен к наличию солей в образце и перегрузке носителя, а детекция пептидов с помощью указанных реактивов возможна лишь при наличии неблокированной N-концевой аминогруппы. Разделение пептидов при хроматографии на бумаге в системе БУВП [77] (табл. 10.4) происходит в соответствии с их коэффициентом распределения между водной и органической фазами: гидрофобные пептиды движутся быстрее, чем гидрофильные. Разрешающая способность хроматографии в БУВП ниже, чем электрофореза, однако для разделения пептидов одинакового размера и заряда ценность метода несомненна.