Практическая химия белка - А. Дарбре 1989
Фрагментация полипептидной цепи ферментативными методами
Общие условия ферментативного гидролиза
Буферные растворы
Подбор оптимальных условий гидролиза осуществляют, варьируя четыре основных параметра: состав буфера, соотношение фермент : субстрат, температуру и время. Конкретные условия, в которых следует проводить гидролиз данным ферментом, приведены в разделах, посвященных каждому ферменту. Однако предварительно необходимо сделать несколько замечаний общего характера.
Обычно используют летучие буферы, особенно в том случае, если полученные пептиды предполагают разделять с помощью ионообменной хроматографии или электрофореза на бумаге. Если дальнейшее разделение пептидов проводят методом ВЭЖХ, концентрация солей значения не имеет (гл. 6). Для большинства ферментов оптимальным диапазоном pH является 7,5—8,5. В этом диапазоне обычно используют 1%-ный (масс./об.) бикарбонат аммония (pH 7,9) и 100 мМ N-этилморфолинацетат. Гидролиз пепсином проводят в 10 мМ НСl или 5%-ной уксусной кислоте при pH 2,0. Для сохранения активности некоторых ферментов необходимо добавлять в реакционную смесь специфические реагенты, например сульфгидрильные реагенты (см. клострипаин и папаин) или ионы Са2+ (см. термолизин).