Практическая химия белка - А. Дарбре 1989

Фрагментация полипептидной цепи ферментативными методами
Методы модификации белков
Модификация остатков аргинина

Для модификации остатков аргинина в белках предложен ряд реагентов, например малоновый ангидрид [53], циклогексан-дион [105], 2,3-бутадион [121] нитромалоновый альдегид [95]. Сведения о некоторых способах модификации можно найти в работе [120]. К сожалению, в большинстве случаев реакцию проводят в жестких условиях (при экстремальных pH), что приводит к необратимой модификации остатков аргинина и сопровождается побочными реакциями. Далее приводится методика с использованием 1,2-циклогександиона [75]. Полученные производные аргинина устойчивы при кислотных pH, образуют комплекс с борат-ионом, устойчивый при pH 8. Методика описана в работе [98].

Модификация остатков аргинина 1,2-циклогександионом. Белок растворяют в 0,2 М -Na-боратном буфере (pH 9,0; 10 мг/мл) и инкубируют с 0,15 М 1,2-циклогександионом при 35 °С в течение 2 ч. Подкисляют реакционную среду равным объемом 30%-ной уксусной кислоты, избыток реагента удаляют с помощью диализа против разбавленного раствора уксусной кислоты, диализат высушивают лиофильно. Согласно другому варианту методики, по завершении инкубации реакционную смесь диализуют против 0,1 М Na-боратного буфера (pH 8,0). В этом случае получают препарат, пригодный для ферментативного гидролиза.

Модифицированные остатки аргинина деблокируют путем инкубации при pH 7,0 в 0,5 М растворе гидроксиламина при 35 °С в атмосфере инертного газа в течение 12 ч.