Химия и биология белков - Ф. Гауровитц 1953
Методы выделения, очистки и определения белков
Необратимое осаждение белков
Белки осаждаются солями тяжелых металлов (Cu, Pb, Hg, UО2, Fe), некоторыми органическими кислотами (трихлоруксусная, сульфосалициловая, пикриновая и др.) и образующими коллоидные растворы кислотами (вольфрамовая, дубильная) и основаниями (гидроокись железа). Эти осадители обычно нельзя использовать для получения чистых белков, так как многие белки при их действии денатурируются. Однако в последнее время было найдено, что если соль тяжелого металла добавлять осторожно и избегать избытка, то можно получить в кристаллической форме соли тяжелых металлов некоторых белков [29]. Из соединений белков с некоторыми тяжелыми металлами, например с цинком, можно получить белки в нативном состоянии [30].
Если к белковым растворам добавлять избыток осаждающих растворов, то белки денатурируются и количественно осаждаются из растворов.
Этот метод широко применяется в клинических лабораториях для удаления белков из биологических жидкостей, для количественного определения белков (например, в кровяной сыворотке) и для качественного обнаружения белков в моче и в других биологических жидкостях.
образуются главным образом трнпептидами н тетрапептидами. Строение медного комплекса тетрапептида, по этим данным, может быть представлено следующим образом:
При осаждении белков упомянутыми выше способами очень трудно отделить осажденный денатурированный белок от вещества, примененного для осаждения. Этого затруднения можно избежать, если для денатурации и осаждения белков использовать их тепловую коагуляцию или метод Севага [31]. Метод Севага состоит в том, что белок денатурируется и переводится в нерастворимое состояние путем встряхивания с хлороформом. Избыток хлороформа удаляется выпариванием.
Необратимое осаждение белков фосфорновольфрамовой кислотой используется в гистохимии для обнаружения белков в тканевых срезах. Присутствие белка обнаруживают измерением поглощения рентгеновских лучей тяжелым атомом вольфрама в высушенных тканевых срезах [32].