БІОТЕХНОЛОГІЯ - Іншина Н.М. - 2009

РОЗДІЛ 1. ГЕННА ІНЖЕНЕРІЯ

Клонотеки кДНК

Комплементарна ДНК (кДНК) - це ДНК, синтезована на основі мРНК за участі ферменту зворотної транскриптази.

кДНК, на відміну від геномної ДНК, не містить інтронів. Ця відмінність мас практичне значення. Клони кДНК використовуються при одержанні інсуліну людини або інших білків в клітинах Е.соїі.

Спочатку з клітин людини виділяють мРНК. Особливістю структури молекули мРНК еукаріот є наявність послідовності з аденілових нуклеотидів (полі-(А)-хвіст). Виділити мРНК можна, якщо препарат РНК пропустити через колонку з інертною матрицею, що несе тимін. рРНК і тРНК швидко проходять через колонку, а мРНК зв’язується з нею за рахунок утворення водневих зв’язків А-Т між хвостом і лігандом. мРНК можна елюювати, використовуючи розчини низької іоннної сили.

Схема синтезу кДНК наведена на рис. 1.1.

Рис. 1.1. Синтез кДНК на основі мРНК за участ і зворотної транскриптази

Для клонування молекул кДНК як вектори використовують фаг λ або плазміди. Молекули кДНК не мають «липких» кінців, проте розроблено методи приєднання «липких» кінців до них.

Уведення кДНК у клітини бактерій забезпечує синтез значної кількості її копій. Клонування є одним із способів ампліфікації нуклеотидних послідовностей ДНК.