ИММУНОЛОГИЯ - Ройт А. - Мир 2000

Глава 29. Иммунологические методы

ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОМПЛЕМЕНТА

Наиболее простой способ измерения активности комплемента состоит в определении концентрации сыворотки, вызывающей гемолиз 50 % клеток в стандартном препарате эритроцитов, сенсибилизированных антигеном (ЭСА). Реакцию проводят в пробирках или па микропланшетах. Для приблизительной оценки активности комплемента более удобен простой радиальный гемолиз. Этот метод сходен с простой радиальной иммунодиффузией, за исключением того что в лунки вносят исследуемую сыворотку, а гель содержит ЭСА. Вокруг лунки, содержащей активный комплемент, образуется зона гемолиза, величина которой пропорциональна количеству комплемента в исследуемой сыворотке. Данный метод позволяет определять общую активность компонентов классического и литического путей активации (С1—С9), однако если в сыворотке обнаружен дефицит комплемента, этим методом невозможно установить, отсутствием какого ком попета дефицит обусловлен.

Существуют также методы для определения различных отдельных компонентов комплемента по их содержанию или функциональной активности. Это важное различие, так как компонент может присутствовать в нормальном количестве, но быть функционально неактивным. Содержание (уровень) индивидуальных белков комплемента обычно определяют при помощи радиоиммуноанализа (РИА) или ферментного иммуносорбентного анализа (ELISA), используя антитела, специфичные к данному белку. Для измерения функциональной активности в суспензию сенсибилизированных эритроцитов вносят все компоненты комплемента, необходимые для лизиса, за исключением исследуемого белка (рис. 29.18).

Рис. 29.18. При помощи этих тестов в исследуемой сыворотке определяют отдельные компоненты комплемента. Определение заключается в том, что к суспензии сенсибилизированных эритроцитов добавляют 1) специфический С-реагент, содержащий все необходимые для лизиса компоненты комплемента, за исключением одного, и 2) исследуемую сыворотку. Например, чтобы определить компонент С4 в исследуемой сыворотке, к сенсибилизированным антителами эритроцитам добавляют сыворотку морской свинки с дефицитом С4 (С-реагент). Если исследуемая сыворотка содержит С4, произойдет гемолиз, и наоборот, в отсутствие С4 гемолиза не будет. В таблице приведены комбинации реагентов, используемых для определения каждого из компонентов комплемента. Сенсибилизацию эритроцитов антителами производят с таким расчетом, чтобы при взаимодействии ЭСА с комплементом получить определенную степень гемолиза. Реагентами могут быть сыворотки, исходно не содержащие один из компонентов комплемента или подвергнутые физико-химической обработке для удаления либо инактивации того или иного компонента. Можно проводить количественное определение компонентов, используя, например, простой радиальный гемолиз или реакцию 50% гемолиза в пробирках. (ЭСА - эритроциты, сенсибилизированные антигеном; ЭСАК - эритроциты, сенсибилизированные антигеном и комплементом; ЭГ ТА - этиленгликоль-тетраацетат.)