БИОХИМИЯ - Основные питательные вещества человека - 2016 год
4. ВИТАМИНЫ
4.5. Практическая часть. Обнаружение витаминов
Цель работы - изучить структуру и некоторые качественные реакции витаминов.
Опыт 1. Диазореакция на витамин В1 (тиамин)
В основе этого метода обнаружения лежит способность тиамина образовывать в щелочной среде с диазореактивом (диазо- сульфаниловой кислотой) комплекс оранжевого цвета.
Диазореактив готовят, внося в пробирку по 5 капель 1 % раствора сульфаниловой кислоты (Н2NС6Н4SO3Н) и 5 капель 5 % раствора нитрита натрия (NaNO2). В эту же пробирку добавляют на кончике скальпеля порошок витамина В1 или 2 - 3 капли раствора витамина В1 для инъекций, затем по стенке наклоненной пробирки осторожно приливают 5 - 7 капель 10 % раствора карбоната натрия (Na2CO3). На границе двух жидкостей появляется кольцо оранжево-красного цвета.
Опыт 2. Реакция окисления витамина В1 в тиохром
Витамин В1 под действием железосинеродистого калия окисляется в тиохром - пигмент желтого цвета:
В пробирке смешивают 3 - 5 капель 5 % раствора витамина В1 (или 1 - 2 мг порошка) с 5-10 каплями 10 % раствора гидроксида натрия (NаОН) и добавляют 1 - 2 капли 5 % раствора железосинеродистого калия - К3Fe(СN)6. При нагревании смесь окрашивается в желтый цвет в результате окисления тиамина в тиохром, который в щелочном растворе при облучении ультрафиолетом дает интенсивную флуоресценцию.
В отчете указать ее цвет.
Опыт 3. Реакция восстановления витамина В2 (рибофлавина)
Водород, образующийся при добавлении металлического цинка к концентрированной соляной кислоте, восстанавливает рибофлавин через промежуточное соединение красного цвета (родофлавин) в бесцветный лейкофлавин.
В ходе опыта окраска раствора переходит в розовую, затем раствор обесцвечивается.
В пробирку вносят 10 капель взвеси рибофлавина в воде (0,025 % раствор), туда же добавляют 5 капель концентрированной соляной кислоты (НСI) и небольшой кусочек металлического цинка. Выделяющийся водород реагирует с рибофлавином, и окраска раствора переходит из желтой в красную и розовую, а затем раствор обесцвечивается и не флуоресцирует.
Опыт 4. Качественная реакция на рутин (витамин Р)
Метод основан на взаимодействии рутина и хлорида железа (III) с образованием комплексного соединения зеленого цвета, имеющего следующее строение:
На аналитических весах взвешивают 100 мг чая, помещают навеску в стакан объемом 50 мл, добавляют 15 мл дистиллированной воды и кипятят в течение 3 минут. Дают смеси остыть, отбирают в пробирку 1 мл жидкости и вносят в нее несколько кристалликов хлорида железа (III) - FеСl3. Перемешивают и разбавляют в 2 - 3 раза дистиллированной водой. Наблюдают за появлением окрашивания.
В отчете сделать вывод о присутствии в чае витамина Р.
Опыт 5. Восстановление феррицианида калия витамином С
Метод основан на том, что аскорбиновая кислота, содержащаяся в вытяжке из шиповника, восстанавливает железосинеродистый калий. Продукт восстановления образует с хлорным железом (III) плохо растворимую в воде соль - берлинскую лазурь, выпадающую в виде темно-синего осадка.
В каждую из двух пробирок вносят по 2 - 3 капли 5 % раствора железосинеродистого калия - К3Fе(СN)6 и 1 % раствора хлорида железа (III) - FеСl3, перемешивают. Жидкость приобретает бурую окраску. Затем в первую пробирку добавляют 5 - 10 капель 1 % вытяжки из шиповника, а во вторую - такое же количество дистиллированной воды. В первой пробирке жидкость окрашивается в зеленовато-синий цвет, а затем выпадает темно-синий осадок (берлинская лазурь), который при осторожном наслаивании дистиллированной воды становится более отчетливым. Во второй пробирке жидкость окраски не меняет.
Опыт 6. Йодная проба на витамин С
При добавлении раствора сока лимона или раствора аскорбиновой кислоты к раствору Люголя последний обесцвечивается за счет восстановления молекулярного йода аскорбиновой кислотой и образования йодистоводородной кислоты.
В две пробирки вносят по 10 капель дистиллированной воды и по 1 - 2 капле раствора Люголя (0,1 % раствор йода - I2 в 2 % растворе йодида калия - Кl). В одну пробирку добавляют на кончике шпателя порошок аскорбиновой кислоты (или 10 капель раствора сока лимона), а в другую - несколько капель дистиллированной воды. В пробирке с аскорбиновой кислотой раствор йода обесцвечивается.
Опыт 7. Проба Друммонда на ретинол (витамин А)
Метод основан на способности серной кислоты дегидратировать ретинол с образованием окрашенных продуктов. При смешивании раствора рыбьего жира, содержащего витамин А, в хлороформе с концентрированной серной кислотой происходит окрашивание смеси в красно-бурый цвет.
В сухой пробирке смешивают 2 капли рыбьего жира с 5 каплями хлороформа (СНСl3) и добавляют 1 - 2 капли концентрированной серной кислоты (Н2SO4). Окраска раствора изменяется.
Опыт 8. Качественная реакция на витамин Е (токоферол)
В сухую пробирку вносят 5 капель 0,1 % спиртового раствора витамина Е и10 капель концентрированной азотной кислоты (HNO3), энергично встряхивают. На границе двух фаз расслоившейся эмульсии со временем появляется кольцо красного цвета.