Практическая химия белка - А. Дарбре 1989

Дисульфидные связи
Специальные методы
Диагональное картирование

Метод диагональных карт был разработан специально для анализа цистинсодержащих пептидов [4, 6]. Известны различные модификации этого метода, однако наиболее часто используют его исходный вариант — электрофорез на бумаге. Ферментативный гидролизат исследуемого белка разделяют электрофоретически на бумаге ватман ЗММ (400X400 мм). Затем электрофореграмму высушивают и выдерживают в парах надмуравьиной кислоты в течение 2 ч для окисления S—S-связей. После высушивания в вакуум-эксикаторе над NaOH проводят электрофорез в аналогичных условиях, но в направлении, перпендикулярном первоначальному. В результате все немодифицированные при окислении пептиды располагаются на электрофореграмме по диагонали, под углом 45°. Цистинсодержащие пептиды, которые подвергались промежуточному окислению, образуют лары фрагментов, располагающиеся вне диагонали. Эти зоны элюируют и полученные пептиды анализируют стандартными методами. Для выделения цистинсодержащих пептидов после первого электрофореза можно вырезать контрольную полоску, обработать парами надмуравьиной кислоты, подшить ее к другому листу бумаги и провести электрофорез вторично. Сравнивая полученную электрофореграмму с исходной, можно локализовать зоны, соответствующие цистинсодержащим пептидам, вырезать их и элюировать интактный материал для последующих операций. Известные модификации этого метода включают получение различных производных цистеина, например S-аминоэтилцистеина [33].