Практическая химия белка - А. Дарбре 1989
Разделение смесей белков и пептидов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
Адсорбция и распределение полипептидов и белков
Подвижная фаза
Обычно разделения проводят в кислых буферах (pH —2), содержащих 0,1%-ную ТФУ или 0,1 М растворы фосфата или ацетата. Слабокислые (pH 4) и нейтральные (pH 7) буферы оказались удобными для последующего более тонкого фракционирования [23]. Из органических растворителей чаще всего применяют ацетонитрил и пропанол.
Для предварительной оценки условий разделения можно использовать одну из следующих систем:
1) 0,1 М NaH2PО4—Н3РО4 (pH 2,1, общее содержание фосфата 0,2 моль/л), градиент концентрации ацетонитрила 10 — 40% [14];
2) 1 М пиридин — 2 М муравьиная кислота (pH 4,0), линейный градиент концентрации н-пропанола 20—40% + 1 М ацетат натрия (pH 7,5) или линейный градиент концентрации н-пропа- нола 0—40% [23];
3) 0,1%-ная ТФУ или ГФМК с градиентом концентрации ацетонитрила 0—40% [1] (рис. 6.9). Использование этого раствора позволяет детектировать поглощение элюата при 206—215 нм; препараты, содержащиеся в элюате, легко лиофилизировать.