Практическая химия белка - А. Дарбре 1989

Разделение смесей белков и пептидов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
Обращенно-фазовое разделение пептидов

Впервые ОФ-ВЭЖХ была использована для разделения смесей пептидов в 1976 г. сразу в нескольких лабораториях независимо друг от друга. С тех пор опубликовано очень много сообщений об использовании самых разных носителей и подвижных фаз для разработки методик быстрого высокоэффективного разделения биологически активных пептидов или фрагментов белков. Поскольку многие однотипные сорбенты обладали незначительными различиями в разделяющей способности, в литературе появилось множество сходных между собой методик.

РИС. 6.9. Разделение нативных белков (—20 мкг каждого) при помощи ОФ-ВЭЖХ с использованием широкопористых сорбентов с короткими алкильными цепями. Белки фракционировали в 0,01 М ТФУ с градиентом концентрации ацетонитрила (20—70%) при скорости потока 0,2 мл/мин. Использована колонка Ultrapore RPSC (4,6X75 мм). Определение по оптической плотности при 280 нм.

На процесс разделения пептидов влияют: природа органического растворителя, содержание воды, ионная сила, pH, температура, способность системы к ион-парным и ионообменным взаимодействиям.