Практическая химия белка - А. Дарбре 1989
Аналитические методы
Введение
А. ДАРБРЕ (A. DARBRE, Department of Biochemistry, King’s College London, Strand, London WC2R 2LS, U.K.), с участием Дж. P. КЛАМПА (J. R. CLAMP, Department of Medicine, Medical School, University of Bristol, University Walk, Birtol BS8 1TD, U.K.)
В этой главе рассматриваются аналитические приемы, получившие широкое применение в химии белка (если они не обсуждаются в других разделах книги). Неискушенному читателю может показаться, что здесь дано слишком много альтернативных методов и в некоторых случаях вполне достаточно было бы привести один из них. Автор признает возможность такого рода критических замечаний, но подчеркивает, что нет такого метода, который оказался бы в одинаковой степени пригодным для всех белков, поскольку, с одной стороны, весьма различны природа исследуемых объектов и их доступность в количественном отношении; с другой — лаборатории, занимающиеся изучением белков, резко отличаются друг от друга по оснащенности реактивами, приборами и другими техническими средствами. В целях сокращения объема рассматриваемого здесь материала некоторые из методов, например изотахофорез и хроматофокусирование, не обсуждаются.
Все большее значение в химии белка приобретают проблемы загрязнения образцов посторонними примесями, поскольку чувствительность методов анализа повышается, а исследователю часто приходится иметь дело с очень малыми количествами вещества. Было показано, что источниками примесей при анализе аминокислот газожидкостной хроматографией могут быть отпечатки пальцев, грязное стекло, вода, соляная кислота, резиновые перчатки и более очевидные загрязнения — слюна, кусочки кожи, сигаретный дым [310]. Более 150 пептидов было обнаружено в одном отпечатке пальцев [242] (разд. 8.19.2.2).
Вполне вероятно, что в будущем применение высокочувствительных методов анализа аминокислот (на уровне ниже пикомольного) потребует проводить приготовление растворов всех реагентов и буферов и все операции по разделению белков в асептических условиях. Однако требования сегодняшнего дня касаются прежде всего стекла, воды и реагентов, которые должны быть высокой степени чистоты.