Практическая химия белка - А. Дарбре 1989

Аналитические методы
Стекло

Стекло, в частности трубки, используемые для гидролиза, должно быть очищено обработкой в течение ночи горячей смесью серная кислота — азотная кислота (3:1)*, отмыто и высушено в вертикальном положении в воздушном термостате при 110 °С. Не рекомендуется для очистки стекла использовать хромовую кислоту из-за возможного образования продуктов окисления, остающихся на поверхности. Перед использованием пробирок или трубок следует прокалить их в течение нескольких часов при 550—625° (поместив их в стеклянный сосуд, закрытый алюминиевой фольгой) для разрушения возможных примесей аминокислот; после такой обработки посуду надо хранить в закрытом пыленепроницаемом контейнере.

При работе с микрограммовыми количествами вещества становятся ощутимыми потери за счет адсорбции на стенках сосуда. Они могут быть сведены к минимуму обработкой поверхности стекла или соответствующей модификацией растворителя. В этом отношении пробирки из Полипропилена или поликарбоната лучше, чем стеклянные. Пробирки из стекла могут быть обработаны силилирующим реагентом, например диметилдихлоросиланом в четыреххлористом углероде (2%-ный раствор [137]) или триметилхлоросиланом в толуоле (5%-ный). После вымачивания в течение 5 мин в указанных растворах растворителю дают стечь, стекло промывают ацетоном и высушивают в вертикальном положении в термостате при 110 °С.

Силанизируют также стеклянные пластинки для электрофореза в полиакриламидном геле [274, 309]. Для этого их моют детергентом, водой, ацетоном и погружают в 0,2%-ный раствор полификса D (фирма Desaga) в смеси этанол — вода (1:1) или опрыскивают этим раствором. После такой обработки пластинки сушат под инфракрасной лампой на расстоянии —20 см (температура —60 °С); соблюдение условий высушивания очень важно. Силанизированные пластинки можно хранить в течение нескольких недель.

Стекло может быть также обработано сначала 3-аминопропилтриметоксисиланом, а затем глутаровым альдегидом с последующим добавлением бычьего сывороточного альбумина (БСА) и восстановлением борогидридом натрия или 1%-ным (масс./об.) раствором полиэтиленгликоля 20 000 в деионизованной воде и высушено при 110 °С [5].

Однако обработка стеклянных и пластиковых поверхностей разными реагентами может привести к их загрязнению, поэтому для снижения адсорбционных потерь белков лучше прибегать к модификации растворителя. С этой целью удачно применены добавки к растворителю глицерина (до 50%-ной концентрации) и тритона Х-100 (до 0,2 ммоль) [356]. При работе в пластиковых емкостях может быть использован глицерин или тритон Х-100 для растворов как с низкой, так и с высокой ионной силой, а в стеклянных сосудах рекомендуется применять глицерин для растворов с низкой и тритон Х-100 с высокой ионной силой. Следует заметить, что адсорбционная способность белков весьма различна.

* Во всех случаях, где это не указано особо, содержание растворителей в смеси дано в объемных соотношениях. — Прим. перев.