Практическая химия белка - А. Дарбре 1989

Определение аминокислотной последовательности пептидов по методу Эдмана с идентификацией дансиламинокислот
Введение

Г. УИНТЕР (G. WINTER, MRC Laboratory of Molecular Biology, Hills Road, Cambridge, CB'2 2QH, U.K.)

Дансилхлорид (1-диметиламино-5-нафталинсульфохлорид) реагирует с а-аминогруппой пептида (и с боковыми группами остатков цистеина, тирозина, лизина и гистидина) с образованием дансильного производного пептида (ДНС-пептида). При кислотном гидролизе модифицированного таким образом пептида его N-концевой остаток отщепляется в виде флуоресцирующей дансиламинокислоты, которая легко может быть идентифицирована хроматографией на полиамидных пластинках [5]. В условиях гидролиза полностью разрушаются дансильные производные триптофана и амидов дикарбоновых аминокислот и частично дансилпролин и дансилсерин; из производных, образующихся по боковым группам, сохраняются лишь ε-дансиллизип и О-дансилтирозин.

При определении аминокислотной последовательности по дансильной методике [6, 7] после каждого цикла отщепления по Эдману N-концевой остаток укороченного пептида анализируется с помощью дансилирования небольшой пробы образца. Эта методика выгодно отличается от собственно метода Эдмана и его ДАБИТЦ — ФИТЦ-модификации [1] отсутствием промывок фенилтиокарбамилпептидов после стадии конденсации, что исключает возможные потери пептидов (особенно неполярных) за счет растворения в органической фазе. Постепенное уменьшение количества анализируемого материала (в результате отбора на дансилирование) компенсируется более высокой чувствительностью определения флуоресцирующих производных аминокислот.