Практическая химия белка - А. Дарбре 1989

Методы твердофазного анализа аминокислотной последовательности
Обсуждение
Твердофазный анализ небольших пептидов

Методы твердофазного анализа применимы почти ко всем типам пептидов. Они разработаны для пептидов, содержащих до 30 аминокислотных остатков, но могут быть использованы для анализа и более крупных пептидов и белков. Обязательные стадии включают: 1) присоединение пептидов через а- и ε-аминогруппы к носителям на основе полистирола или стекла путем активации n-фенилендиизотиоцианатом и 2) присоединение через С-концевую карбоксильную группу активацией водорастворимыми карбодиимидами. Наиболее полезными носителями оказались аминополистирол и 3-аминопропилстекло. При использовании носителей на основе стекол в продуктах отщепления присутствует меньше примесей, поэтому в последние годы они стали предпочтительными. Выход на стадии присоединения к носителям составляет 60—90% ^и зависит от метода конденсации, качества носителя и умения подобрать условия растворения образца для присоединения. Помимо конденсации при помощи двух указанных методов, можно с высоким выходом присоединять пептиды через лактон гомосерина к ТЭТА-полистиролу, 3-аминопропилстеклу и ß-N-аминоэтил (3-аминопропил)стеклу. При работе с ТЭТА-полистиролом необходимы тщательное соблюдение условии синтеза самого ТЭТА-полимера, промывка носителя перед использованием и хранение его под азотом. Были предложены носители других типов, например полимеры на основе поли-М-алкилакриламида [2, 10] или макропористых производных полистирола [26]. Но до сих пор эти смолы не нашли широкого применения для изучения структуры полипептидов, высушенных из биологических источников. С новыми подходами в создании носителей можно ознакомиться в главе 16.