Практическая химия белка - А. Дарбре 1989

Методы твердофазного анализа аминокислотной последовательности
Обсуждение
Твердофазный анализ крупных пептидов и белков

Для этой цели наиболее предпочтительны носители на основе стекла. Методика состоит в присоединении активированных лизилсодержащих пептидов, тогда как фрагменты, не содержащие такие группы или содержащие главным образом Arg, присоединяются труднее. Общий метод конденсации больших фрагментов, не содержащих Lys, состоит в присоединении по С-концевой аминокислоте при помощи карбодиимидов. Присоединение белков к аминополистиролу проходит с очень малым выходом, но при замене его на АПС или ß-АПС выходы увеличиваются до 20—60%. Следует контролировать не только степень присоединения, по и саму возможность анализа последовательности аминокислот, полученных пептидилполимеров. Опыт показывает, что, несмотря на отличный выход в конденсации белка с носителем, нерастворяющиеся «пришитые» белки могут давать плохие выходы N-концевых аминокислотных остатков. Опыт показывает, что твердофазный анализ последовательности белков на микроуровне лучше всего проводить после присоединения белка через ε-NН₂-группы.