Практическая химия белка - А. Дарбре 1989

Определение С-концевой последовательности аминокислот
Определение С-концевых групп
Селективное восстановление

Химическое восстановление С-концевой аминокислоты в соответствующий спирт было первой химической реакцией, использованной для определения С-концевой аминокислоты белков. Например, инсулин нагревали с LiAlH₄ в N-этилморфолине при 55 °С в течение 8 ч и определяли полученные аминоспирты методом хроматографии на бумаге [26]. Реакцию восстановления проводили также после предварительной этерификации всех карбоксильных групп белка [17]. При этом использовали мягкий восстанавливающий агент LiBH₄ в тетрагидрофуране, затем количественно определяли аминоспирты, полученные из С-концевых аминокислот. Наряду с основными процессами происходит восстановительное расщепление пептидных связей (1—2%) и перевод пептидных карбонилов в метиленовые группы.

Для восстановления С-концевых аминокислот ди- и трипептидов использовали коммерчески доступный дигидробис(2-метоксиэтокси) алюминат натрия [75]. Метод позволяет исключить предварительную этерификацию карбоксильных групп. Аминоспирты идентифицировали бумажной хроматографией. До сих пор неизвестно о применении этого способа восстановления для определения С-концевых аминокислот белков. Сообщалось, что NaBH₄ в водном растворе (но не в органическом растворителе) селективно и почти количественно восстанавливает этерифицированные С-концевые аминокислоты в соответствующие спирты [32]. При работе с лизоцимом, инсулином быка, конканавалином А были получены ожидаемые производные, при этом не было обнаружено побочных процессов. Этот подход может быть доведен до практической методики С-концевого анализа белков, хотя дальнейшее развитие событий во многом зависит от степени надежности аналитического определения аминоспиртов, получающихся из всех обычных аминокислот.