Практическая химия белка - А. Дарбре 1989

Применение масс-спектрометрии электронного удара для определения аминокислотной последовательности пептидов и белков
Способы подготовки проб
Ацетилирование

Обработка уксусным ангидридом при комнатной температуре в течение одной минуты приводит к защите а-аминогруппы пептида, а в течение трех часов — к полной модификации ε-аминогрупп. В присутствии подходящего основания обе аминогруппы ацетилируются за время около одной минуты. Ниже приведены две методики ацетилирования, каждая из которых пригодна для модификации пептидов с неизвестным аминокислотным составом.

19.4.4.1. Продолжительное ацетилирование. Образец растворяют в 100 мкл воды, к раствору добавляют 500 мкл метанольного раствора уксусного ангидрида (3:1) и реакционную массу выдерживают в течение 3 ч.

Избытки реагентов удаляют вакуумированием, при котором не наблюдается перебрасывания реакционной массы.

19.4.4.2. Кратковременное ацетилирование. Пробу растворяют в 100 мкл раствора бикарбоната натрия, приготовленного так, чтобы в 1 мл воды содержался 1 мг соли, и по истечении 30 с добавляют раствор уксусного ангидрида в метаноле (1 : 3). Примерно через минуту реакционную массу откачивают сначала водоструйным насосом, принимая во внимание возможность перебрасывания, а затем форвакуумним или применяют лиoфильную сушку.