Практическая химия белка - А. Дарбре 1989

Фрагментация полипептидов химическими методами
Расщепление по остатку триптофана
Расщепление по остатку триптофана бромоцианом в гептафторомасляной кислоте

Взаимодействие бромоциана с остатком триптофана в белках может привести к расщеплению пептидной связи с участием карбоксильной группы. Умеренный выход продуктов реакции (~20%) наблюдался в случае ß-лактоглобулина [17] и глутаматдегидрогеназы Neurospora crassa [210]. Было показано [134—136], что выход продуктов реакции возрастает при использовании большого избытка реагента (10 000 моль/моль белка) и более высокой кислотности среды (что достигается заменой продажной 70%-ной муравьиной кислоты па гептафторомасляную).

Недавно показано [51]. что механизм реакции заключается в окислительном галогенировании ядра триптофана. Модельное соединение N-ацетилтриптофанамид под действием избытка бромоциана превращается в ІМ-ацетил-5-бромодиоксоиидолиллактон (образуются также другие продукты), находящийся в равновесии с его открытой формой (аналогично реакции с N-бромосукцинимидом) [137]. В условиях проведения реакции идет частичное бромирование свободного тирозина с образованием бромотирозина и окисление свободного метионина до метионин-S-оксида. Полагают [51], что в присутствии кислоты нуклеофил (индолил, фенол или тиоэфир) атакует атом брома полярной молекулы «псевдогалогена» CNBr с образованием HCN и соответствующего бромпроизводного, который в конечном счете перегруппировывается в другие соединения (окси- и диоксоиндол, сульфоксид):

Однако не исключено, что бромирование вызвано примесью брома, присутствующего в бромоциане.

2.5.4.1. Методика [135]. Апоцитохром (0,1—0,5 мкмоль) растворяют в 2 мл смеси (1:1) 88%-ной муравьиной и гептафторомасляной кислот, прибавляют 700 мг бромоциана и инкубируют без доступа света в течение 24 ч. Реагент и растворители отгоняют в потоке азота, остаток растворяют в 10 мл воды и высушивают лиофильно. Остаток растворяют в 9 М уксусной кислоте и хроматографируют на колонке с сефадексом G-50.