Практическая химия белка - А. Дарбре 1989

Фрагментация полипептидной цепи ферментативными методами
Введение

Дж. М. УИЛКИНСОН (J. М. WILKINSON, Department of Biochemistry, Royal College of Surgeons of England, 35/43, Lincoln's Inn Fields, London WC2A 3PN, U.K.)

Наличие протеолитических ферментов с разнообразной специфичностью позволяет использовать различные подходы к расщеплению полипептидных цепей с целью получения определенных наборов пептидов. Этой проблеме посвящено много обзоров; в одних рассматриваются общие свойства ферментов [7, 62, 76], в других основное внимание уделяется технике ферментативного расщепления полипептидной цепи [42, 50, 56, 99]. Сведения относительно недавно открытых ферментов можно найти в работе [51].

С появлением автоматических методов секвенирования первоочередной задачей исследователя стало получение нескольких крупных и легко доступных фрагментов исследуемого белка. В связи с этим в последнее время возрос интерес к использованию ферментов с высокой специфичностью. Ряд таких ферментов нашел широкое применение, другие, возможно, будут использоваться в ближайшем будущем. Однако известных в настоящее время ферментов бывает недостаточно для получения наборов пептидов с перекрывающейся последовательностью и вопрос поиска новых высокоспецифичных ферментов остается открытым.

В этой главе приведена информация о большинстве ферментов, получивших широкое практическое применение, включая возможные источники получения коммерческих препаратов. Сведения о специфичности ферментов приведены в табл. 3.1 и 3.2. Рассматриваются также вопросы практического применения ферментативных методов гидролиза с учетом последних публикаций; приводятся методы предварительной обработки белков и методы химической модификации с целью ограничения или расширения специфичности фермента.

Обычно в химии белка используют протеолитические ферменты, доступные в виде высокоочищенных коммерческих препаратов. Приготовление препаратов ферментов собственными силами не оправдывает себя. К сожалению, многих ферментов, представляющих несомненный интерес, все еще нет в продаже.

Таблица 3.1. Протеазы с высокой специфичностью

Таблица 3.2. Протеазы с более широкой специфичностью

Тем не менее ниже приводятся методики применения некоторых из них в расчете на то, что соответствующие препараты появятся в ближайшем будущем.