Биохимия - Химические реакции в живой клетке Том 2 - Д. Мецлер 1980

Ферменты: белковые катализаторы клеток
Ингибирование и активация ферментов
Использование ингибиторов для изучения механизмов ферментативных реакций

Аналог субстрата часто связывается только с одной из двух форм фермента, который катализирует многосубстратную ферментативную реакцию, протекающую по механизму типа пинг-понг. Как и в случае неконкурентного ингибирования, зависимости 1/v от 1/[S], построенные для различных фиксированных концентраций ингибитора, представляют собой семейство параллельных прямых. Если для какого-либо фермента получается подобное семейство, это может означать, что имеет место механизм типа пинг-понг. (Следует, однако, иметь в виду, что параллельные прямые в координатах {1/[S]; І/v} могут получиться при ингибировании ферментов, функционирующих в соответствии с последовательным механизмом с упорядоченным присоединением субстратов.) При рассмотрении бимолекулярной ферментативной реакции, характеризующейся упорядоченным присоединением субстратов [схема (6-34)] возникает естественный вопрос: какой из двух субстратов, участвующих в реакции, связывается первым? Если концентрацию одного субстрат поддерживают постоянной и к системе добавляют разные концентрации аналога этого субстрата, не способного к каталитическому превращению, то при построении зависимостей обратной скорости от обратной концентрации другого субстрата параллельные прямые получают в том и только в том случае, когда субстратом с фиксированной концентрацией является В (субстрат, связывающийся вторым), а I — его аналогом. Субстратом, связывающимся первым (А), является тот субстрат, концентрация которого меняется в опыте.

Ингибирование продуктом реакции (разд. А, 9) также дает ценную- информацию о механизме ферментативного процесса. Например, если построить графики зависимостей 1/v от 1/[А], то в случае выполнения механизма с упорядоченным присоединением субстратов (6-34) мы обнаружим. что продукт конкурирует с А, и получим семейство прямых, характерное для конкурентного ингибирования. B то же время зависимости 1/v от 1/[В] в отсутствие и в присутствии продукта Q будут иметь.

вид, характерный для неконкурентного ингибирования. Иными словами, конкурентный характер носят только взаимоотношения между А и Q. Ингибирование продуктом реакции наблюдается также и для ферментов, функционирующих согласно механизму типа пинг-понг, вследствие образования непродуктивных комплексов (разд. А, 10, 6).