МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ И ТИНКТОРИАЛЬНЫЕ СВОЙСТВА БАКТЕРИЙ - Е. Л. Зайцева - 2015
ГЛАВА IV. МИКРОСКОПИЯ БАКТЕРИЙ В ЖИВОМ СОСТОЯНИИ
Исследование микроорганизмов в живом состоянии применяется главным образом для изучения формы и подвижности бактерий, при выявлении запасных веществ клетки. Определение формы и подвижности бактерий из свежевыделенной культуры проводится в препаратах «раздавленной» или «висячей» капли, т. е. в капле на предметном стекле, покрытом покровным.
МЕТОДЫ ПРИГОТОВЛЕНИЯ НАТИВНЫХ ПРЕПАРАТОВ
I. Метод «раздавленной капли». Для приготовления препарата «раздавленной капли» необходимо использовать хорошо обезжиренные стекла, т. к. на поверхности пыльных и жирных стекол микробные клетки не фиксируются.
Материалы:
1) предметное стекло;
2) покровное стекло;
3) изотонический раствор хлорида натрия;
4) пробирка/чашка с культурой бактерий, выросших на плотной/ жидкой питательной среде;
5) бактериологическая петля или стерильная пастеровская пипетка;
6) спиртовка.
Техника приготовления:
1. На середину обезжиренного предметного стекла бактериологической петлей или стерильной пастеровской пипеткой наносят бульонную культуру и равномерно распределяют на площади в 1 см2.
Для приготовления мазка из агаровой культуры на предметное стекло наносят каплю физиологического раствора и в ней эмульгируют одну петлю микробов, взятой со среды.
2. Накрывают покровным стеклом, края которого смазаны вазелиновым маслом, и прижимают его к предметному так, чтобы не образовывались пузырьки воздуха, и жидкость не вышла за края стекла. Капля «раздавливается» между ними. Стеклянной палочкой прижимают покровное стекло к предметному.
3. На покровное стекло наносят каплю иммерсионного масла и микроскопируют с объективом х90, окуляром х7 при слегка опущенном конденсоре.
При работе с относительно крупными бактериями можно пользоваться сухими объективами х40 и даже х8 и обойтись без иммерсионного масла.
Недостаток метода «раздавленной капли» - быстрое высыхание препарата, поэтому его надо микроскопировать сразу после приготовления.
II. Метод «висячей капли» при определении подвижности бактерий выполняется по тому же принципу, но с различием в монтаже камеры.
Материалы:
1) предметное стекло с лункой;
2) покровное стекло;
3) изотонический раствор хлорида натрия (NaCl);
4) пробирка/чашка с культурой бактерий, выросших на плотной/ жидкой питательной среде;
5) бактериологическая петля или стерильная пастеровская пипетка;
6) спиртовка.
Техника приготовления:
1. Берут покровное (не предметное), стекло, наносят на него 1 каплю исследуемой микробной взвеси.
2. Накрывают перевернутым предметным стеклом с лункой, но с таким расчетом, чтобы капля оказалась в ее центре. Для сцепления стекол края лунки смазывают вазелиновым маслом. Предметное стекло слегка прижимают к покровному, в результате чего оба стекла склеиваются. После этого препарат переворачивают покровным стеклом кверху. Капля оказывается висячей над лункой. Получается герметически закрытая камера, в которой капля долго не высыхает.
3. Микроскопию проводят так же, как в предыдущем методе.
Оценка результата: неподвижные микробы в препаратах «раздавленной» и «висячей» капли создают картину броуновского движения, подвижные - проходят с одинаковой скоростью большие пространства, иногда через все поле зрения «вращаясь» вокруг своей оси.
III. Прижизненная окраска бактерий. Для такой окраски применяются сильно разбавленные растворы красителей, которые не оказывают токсического действия на бактерии.
Материалы:
1) предметное стекло;
2) покровное стекло;
3) 0,001% раствора метиленового синего;
4) пробирка/чашка с культурой бактерий, выросших на плотной/ жидкой питательной среде;
5) бактериологическая петля или стерильная пастеровская пипетка;
6) спиртовка.
Техника приготовления:
1. На середину предметного стекла наносят каплю 0,001% раствора метиленового синего, в которую следует внести взвесь бактерий.
2. После чего приготовить препарат «раздавленная капля» и микроскопировать его.