Практическая химия белка - А. Дарбре 1989

Аффинная хроматография белков
Общие приемы аффинной хроматографии
Иммобилизованные лектины

В случае отсутствия очищенных препаратов высокоспецифичных лигандов используют общие приемы аффинной хроматографии, основанные на применении лигандов с групповой специфичностью. В настоящее время наибольшее распространение получили три типа аффинных сорбентов:

1) иммобилизованные лектины для выделения растворимых или включенных в состав клеточных стенок гликопротеинов;

2) иммобилизованные антитела для получения очищенных препаратов антигенов;

3) иммобилизованные кофакторы ферментов.

Хроматография с использованием иммобилизованных лектинов основана на их избирательном сродстве к различным концевым углеводам или группам углеводов в молекуле гликопротеина. Иммобилизованные конканавалин А или лектин чечевицы используют для специфического выделения гликопротеинов или клеток, содержащих остатки глюкозы или маннозы. Иммобилизованный лимулин применяют для выделения гликопротеинов с высоким содержанием сиаловых кислот. Иммобилизованный агглютинин арахиса проявляет специфичность к гликопротеинам, содержащим N-ацетилгалактозамин, а также к популяциям Т-лимфоцитов на различных стадиях дифференциации. Элюирование проводят концентрированными растворами углеводов с соответствующей специфичностью к данному лектину. Например, для элюирования с иммобилизованного конканавалина А или лектина чечевицы используют а-глюкопиранозид, а в случае иммобилизованного лимулина — сиаловые кислоты.