Практическая химия белка - А. Дарбре 1989

Фрагментация полипептидной цепи ферментативными методами
Протеазы с высокой специфичностью
Протеаза подчелюстной железы

Фермент выделен из подчелюстной железы мыши [86, 87]. Максимум активности наблюдается при pH 7,5—8,0. Подробную информацию о свойствах этого фермента можно найти в работе [6]. Показано, что эта сериновая протеаза ингибируется ДФФ, гомологична тромбину [89, 90]. Аналогичные результаты опубликованы в работе [104]. Фермент выпускается в виде коммерческого препарата фирмами Pierce и Boehringer.

3.5.5.1. Специфичность и условия гидролиза.

Специфичность. Изучение действия фермента на различные синтетические и нативные субстраты показало, что фермент специфичен к С-концевой пептидной связи остатков аргинина [88]. На примере гидролиза яичного лизоцима и инсулина быка показано, что гидролиз проходит по некоторым остаткам аргинина и не затрагивает остатки лизина. Аналогичные результаты получены при гидролизе н-цепи иммуноглобулина [113]. При этом идет гидролиз по большинству остатков аргинина, за исключением устойчивых пептидных связей -Arg-Val- и -Arg-Arg. Таким образом, по специфичности фермент аналогичен клострипаину. Однако при обработке фосфатидилхолинсвязывающего белка из печени быка наблюдается расщепление только по одному из 10 остатков аргинина [69].

Условия гидролиза. Гидролиз проводят в 1% NH₄HCO₃ (pH 8,0) при 37 °С в течение различных периодов времени (до 24 ч) при соотношении фермент : субстрат= 1 : 50. Гидролиз останавливают подкислением НСl до pH 1,5—2,0 [88].