Практическая химия белка - А. Дарбре 1989

Фрагментация полипептидной цепи ферментативными методами
Протеазы с высокой специфичностью
Протеаза II из Myxobacter AL1

Подробная характеристика этого фермента приведена в работе [47]. Фермент не выпускается в виде коммерческого препарата.

3.5.7.1. Специфичность и условия гидролиза.

Специфичность. Протеаза II проявляет специфичность к N-концевой пептидной связи остатков лизина, аналогично протеазе из A. mellea [117]. Показано, что гидролиз пенициллопепсина IV в течение 1 ч приводит к расщеплению только по остаткам лизина [13], а гидролиз алкогольдегидрогеназы в течение 4 ч — к расщеплению с аналогичной специфичностью включая гидролиз связи -Pro-Lys- [49]. При этом не идет гидролиз пептидных связей остатков аргинина, хотя в отдельных случаях отмечается неспецифический гидролиз других пептидных связей. Неспецифический гидролиз можно исключить путем уменьшения времени инкубации. Протеаза II гидролизует обе связи -Gly-Lys-фрагмента дигидрофолатредуктазы, полученного после расщепления белка под действием BrCN, с сохранением пептидной связи остатков аргинина [25].

Сравнительный анализ продуктов гидролиза пенициллопепсина IV ферментами из А. mellea и Myxobacter показал, что последний является более специфичным.

Условия гидролиза. Фермент из Myxobacter проявляет максимум активности при pH 8,5—9,0, характеризуется устойчивостью к автолизу, термостабильностью при 60 °С и ингибируется в присутствии 50 мМ ЭДТА [117]. Гидролиз проводят в 20 мМ трис-НСl-буфере (pH 9,0) при 37 °С в течение 4 ч при соотношении фермент : субстрат= 1 : 100 [49].