Химия и биология белков - Ф. Гауровитц 1953

Методы выделения, очистки и определения белков
Фракционирование белковых смесей

Экстракты, полученные из клеток или органов, содержат смеси различных белков. Кровяная сыворотка и другие жидкости тела также неоднородны по своему белковому составу. Осторожно увеличивая или уменьшая ионную силу раствора (или диэлектрическую постоянную) и постепенно доводя pH раствора до изоэлектрической точки различных белков, можно выделить из белковых смесей чистые белки или фракции, содержащие в основном какой-нибудь один белок. Классический метод получения альбуминов и глобулинов основывается на фракционном добавлении сернокислого аммония (см. гл. VIII, стр. 172).

Во многих работах концентрация сернокислого аммония, применяемого для выделения белков, выражается в процентах от насыщенного раствора. Например, раствор, содержащий равные части воды и насыщенного раствора сернокислого аммония, считается полунасыщенным (50% насыщения). Этот способ обозначения не совсем точен, потому что насыщение до некоторой степени зависит от температуры раствора. Лучше поэтому выражать концентрацию сернокислого аммония более принятым в химии способом, например в молях. Кон и его сотрудники успешно применили метод фракционированного осаждения сернокислым аммонием и этиловым спиртом для разделения сывороточных белков. Этим способом ими было получено из сыворотки большое количество фракций, содержащих биологически активные белки (см. гл. VIII). При фракционировании больших количеств белка спиртовый метод имеет преимущества перед другими методами, так как большую часть спирта легко удалить испарением, тогда как удаление солей путем диализа требует много времени и труда. Существенной чертой нового метода является то, что при осаждении белков спиртом систематически варьируются ионная сила, концентрация водородных ионов, температура и диэлектрическая постоянная раствора. Варьируя вышеуказанные факторы, удалось выделить из кровяной сыворотки большое количество новых белков.

В некоторых случаях получение чистого белка из белковых смесей облегчается путем избирательной денатурации сопутствующих белков. Например, неочищенный препарат трипсина можно очистить, нагревая раствор в 0,5 н. НС1 до 90° [18], так как в этих условиях все инертные белки денатурируются.